人间百姓，终于有了近二十年的太平。

　　二十年后，一名老实巴交的穷书生宁采臣(陈晓东 饰)为了替母亲治病而四处奔波忙碌，到南郭镇替老板收帐，哪知南郭镇长年闹鬼，更对陌生人畏如蛇蝎，宁采臣只能在荒郊野外露宿一晚，岂料却遇到了二十年前被阴月圣后夺去的小女孩——聂小倩(徐熙媛 饰)。

　　原来阴月太后回魔界后，为防万一，故把小倩的魂魄抽出，以妖法封于狐妖身上，二十年后，聂小倩长大成人，无意中看到了魔宫的禁书《蓝魔小札》，上面记载了许多人间的爱情故事，令她心生向往。为了要一尝人间真爱，遂想偷偷逃走，却遭魔君七夜发现。

　　七夜答应让小倩去人间，又赠她蓝魔之泪，告诉她只要遇到真爱，对她说出“我爱你”，蓝魔之泪就会发出耀眼光芒。但以百日为限，若是百日内未能寻得真爱，却又不肯回到魔宫的话，聂小倩将受魔神夺命之劫。

　　小倩来到人间，却被兰若寺蜘蛛精魅姬(麦家琪 饰)所制，与雪妖小雪(夏于乔 饰)一起，被迫扮作女鬼勾引男子供魅姬吞食，此时遇到了这个本性善良的书生宁采臣，心生恻隐，欲助他逃走，谁知采臣呆头呆脑，又不知真相，将事情越搞越糟，期间差点连累了他新结识的朋友诸葛流云(吴京 饰)，幸多次被小倩所救，两人暗生情愫。

　　诸葛流云是来自玄心正宗的一名热血青年，到南郭镇来找燕赤霞和司马三娘的女儿红叶(宣萱 饰)求婚，可惜道法低微，误打误撞中闹出不少笑话。

　　燕赤霞和司马三娘的女儿红叶因不满父母离异，离家出走，并以驱邪捉妖为业，红叶赶到兰若寺捉妖，四个人闹在了一起，后来红叶才知道诸葛流云是自己的师兄，但因一直跟随燕赤霞的师父修练，故此和红叶从未见面，此行下山，正是要迎娶红叶。

　　魅姬得知小倩背叛自己，大怒，决定要把小倩抢嫁给黑山老妖，红叶和流云遂奋力抵挡，在小倩出嫁的路上，采臣冒死来救，惜能力有限，眼见众人垂危，阴月皇朝圣君七夜从天而降，秒杀黑山老妖，救下众人。这时百日期限将至，七夜要带走小倩，但采臣为救小倩中了黑山老妖的剧毒，昏迷不醒，小倩不肯离去，说确定自己爱上了宁采臣。宁采臣在死前为解小倩的百日死咒，一定要说出“我爱你”三字试一试，他的努力，使蓝魔之泪终于发光，诅咒消失。而七夜离开前，曾扮成算命书生为红叶占卦，趁隙留下了魔宫续命黑蛾，这时正好为采臣续命了七日。

　　为解开采臣所中的剧毒，小倩与流云携采臣去绝望山庄寻找当今的医药圣手、流云的师娘司马三娘，红叶借故离开。三人赶去，却见司马三娘在山庄中寻欢作乐，更要求他们杀了忘情森林中的怪物，方愿意救治宁采臣。一番波折之后，三人发现那怪物竟然就是流云的师傅，玄心正宗的前任宗主，燕赤霞!原来当年燕赤霞携妻女隐居，因为担心自己放过七世怨侣，真会造成人间的覆灭，天人交战下，忍痛让女儿红叶修炼与敌人同归于尽的玄心奥妙诀了。但他此举被妻子发现，三娘愤怒悲伤之下带着女儿离开燕赤霞，住进绝望山庄，更对自己立下绝情咒语：不让自己踏出绝望山庄半步，于是燕赤霞自己，也因此伤心成狂，变得半人半魔，甚至打伤了来找寻幽泉下落的玄心弟子。

　　流云与小倩得悉其中缘故，唏嘘之下决定尽力周旋，以期化解这对夫妻的仇怨情仇。

　　玄心正宗本决定以人间为重，先解决阴世幽泉危机，但魔宫因七夜离开军营，三贤擅自行动，在玄心正宗营地外埋设阴雷，试图暗算敌人，终于引发了正邪大战。后经司马三娘等人劝解，为救人间，决定暂时罢战联合，共同对付阴世幽泉爆发的危机。经过一番生死搏斗，阴世幽泉之危终于解决，一直镇压着幽泉的莫邪宝剑选择红叶为其新主，但红叶弃之不用。燕赤霞一家亦尽释前嫌，和好如初。燕红叶更以玄心正宗第一人身份，压制玄心宗主金光，令他暂且不得提起正魔之别，大家尽情一聚庆祝。

　　当夜正魔两道同醉。七夜求小倩不要与采臣相爱，小倩虽不知原因，却也只能忍痛答应，采臣遭受此打击，半醉之下抱住早已对他芳心暗许的红叶，流云被一阵琴声吸引来到林中，遇见一身份不明的女子，那女子暗示宁采臣就是七世怨侣，流云在她的指引下正好撞见采臣与红叶相拥……